Запорожан Валерій Миколайович,Марічереда Валерія Геннадіївна,Бикова Наталя Андріївна,Бубнов Володимир Вячеславович
申请号：
UA2016010659
公开号：
UA116765U
申请日:
2016.10.24
申请国别(地区):
UA
年份:
2017
代理人:
摘要：
Спосіб раннього прогнозування ризику розвитку раку тіла матки в жінок із гіперпроліферативними процесами ендометрія включає генетичне дослідження тканини ендометрія. Використовують напівкількісний метод МС ПЛР, для чого виділяють ДНК із зразків тканини з використанням реактиву DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen), при цьому бісульфітну обробку ДНК проводять за допомогою набору EpiTect Bisulfite Kit (Qiagen) відповідно до протоколу, кількість ДНК для бісульфітної обробки ДНК у всіх пробах доводять до 1 мкг/мл, проводять ампліфікацію ДНК за допомогою набору Hot Start DNA Polymeraza Kit за програмою: 95 °C - 15 хв. 95 °C - 30 с, 50 °C - для неметилованої ДНК та 60 °C - для метилованої ДНК, 72 °C - 30 с, 39 циклів 72 °C - 10 хв., потім проводять електрофорез ПЛР-продуктів у 2 % агарозі, далі фарбують етидіум бромідом протягом 20 хв., аналізують відносний вміст метилованої і неметилованої ДНК за допомогою програми Quantity One ID Analysis Software (BIO-RAD, USA) на приладі VersaDoc MP 4000 System (BIO-RAD, USA) за формулою М(%)=A×100/A+В, де: А - площа пику метилованої ДНК, В - площа пику неметилованої ДНК і при значеннях вмісту метилованої ДНК гена SFRP2 вище 25 % прогнозують ризик розвитку раку тіла матки у пацієнток із гіперпроліферативними процесами ендометрія.
