本发明公开了一种梨杂交种苗遗传纯度的鉴定方法,包括如下步骤:(1)提取梨种苗基因组DNA;(2)以SEQ ID NO:1~2所示的核苷酸序列为引物,步骤(1)得到的梨种苗基因组DNA为模板进行PCR扩增,得到扩增产物;(3)利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测步骤(2)得到的扩增产物;(4)分析凝胶电泳结果,若凝胶电泳中同时出现大小为60bp和90bp的条带,则判定该种苗为‘苏翠1号’杂交种苗。该方法具有标记稳定,准确性高,不受被测样品生长阶段与环境影响,在整个生长季节都可以进行,成本低廉,并且能够在短时间内准确地鉴定出梨‘苏翠1号’杂交种苗的遗传纯度等优点。