The present invention relates to a method for obtaining a non-transformed avian cell line for replication of avian viruses in vitro, comprising the following steps: a) culturing avian embryonic stem cells in the presence of a stroma for at least 3 days ； b) Culture in low serum concentration medium for at least 2 days； c) Culture in low serum concentration medium comprising between 1 and 10 mM hexamethylene bisacetamide (HMBA) for at least 2 days； d) Culture in low serum concentration medium for at least 10 days； e) Culture or freezing of an avian cell line allowing the replication of avian viruses. The invention also relates to the cell line thus obtained, and to its use in vaccine preparations. La présente invention concerne un procédé d'obtention d'une lignée cellulaire aviaire non transformée permettant la réplication de virus aviaires in vitro, comprenant les étapes suivantes : a) Mise en culture de cellules souches embryonnaires aviaires en présence d'un stroma pendant au moins 3 jours ； b) Culture dans un milieu à faible concentration de sérum pendant au moins 2 jours ； c) Culture dans un milieu à faible concentration de sérum comprenant entre 1 et 10 mM de hexaméthylène bisacétamide (HMBA), pendant au moins 2 jours ； d) Culture dans un milieu à faible concentration de sérum pendant au moins 10 jours ； e) Culture ou congélation d'une lignée cellulaire aviaire permettant la réplication de virus aviaires. L'invention est également relative à la lignée cellulaire ainsi obtenue, et à son utilisation dans des préparations vaccinales.
