本发明公开了一种特异性检测鲑科鱼类的实时荧光PCR试剂盒及检测方法,该试剂盒包括:PCR缓冲液、dNTP和DNA聚合酶、SEQ ID NO.1或2所示的上游引物、SEQ ID NO.3所示的下游引物、SEQ ID NO.4所示的荧光探针;其检测方法包括:1)提取待测样本DNA;2)对样本DNA和阴性对照样品进行PCR反应,并进行荧光检测;3)选择FAM荧光检测模式,基线调整取3~15个循环的荧光信号,以阈值线刚好超过正常阴性对照样品的最高点设定阈值线;若待测样品荧光增长曲线超过阈值线,并呈良好的对数增长,则判断为阳性。本发明能快速、准确地检测和鉴定鲑科鱼类成分,降低常规PCR扩增的假阳性率。