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一种用于卵周隙内注射慢病毒生产转基因羊的方法
- 专利权人:
- 新疆维吾尔自治区畜牧科学院中国—澳大利亚绵羊育种研究中心
- 发明人:
- 黄俊成,汪立芹,刘明军,赵云程,陈童,林嘉鹏,王静
- 申请号：
- CN200910113566.4
- 公开号：
- CN101760476B
- 申请日:
- 2009.12.08
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2012
- 代理人:
- 欧咏
- 摘要：
- 本发明提供一种用于卵周隙内注射慢病毒生产转基因羊的方法，将慢病毒载体与病毒包装质粒共转染为293T细胞，至48小时后离心，得慢病毒的浓缩液，将其注射于成熟24-25小时的卵母细胞卵周隙内，与精子结合实施体外受精，12小时后置于培养液中培养，48小时后统计卵裂率和转基因率。其一取卵母细胞用体外成熟液洗涤3-4次，按25-30枚/滴入体积75-78μl/滴的体外成熟培养液，在5％CO2、95％下培养；其二体外成熟的卵母细胞脱去卵丘细胞，慢病毒注射入细胞卵周隙内，用体外受精液洗涤2-4次，按25-30枚/滴入受精液内；解冻精液，移入受精液，离心弃上清液，沉淀精子加受精液滴，孵育；取受精12-18小时的卵，按上步处理后入四孔培养板内培养即可；其三为药剂慢病毒液、抽卵液、成熟液、显微操作液、SOF、受精液、培养液、养血清的必备。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
