本发明一种血清4型禽腺病毒五邻体蛋白及其制备方法和应用,属于免疫学领域。所述制备方法,包括下述步骤:化学合成SEQ ID NO.1所示五邻体基因序列;制备重组pFastBac‑1‑penton载体;用制备的重组pFastBac‑1‑penton载体转染sf9细胞,在sf9细胞表达得到重组蛋白;对得到的重组蛋白经Ni‑NTA纯化后得到纯化的血清4型禽腺病毒五邻体蛋白。所述血清4型禽腺病毒五邻体蛋白由上述制备方法制得。所述的血清4型禽腺病毒五邻体蛋白在制备预防禽腺病毒疫苗中的应用。本发明具有以下优点:基因合成无需模板,更经济、简便;更能提高penton的表达量;易于工业化规模生产。