本发明涉及“水稻黑条矮缩病毒RNA干涉载体、构建方法及应用”,属于生物技术领域。本发明将如SEQ ID NO 3所示的序列作为正、反义链建立了水稻条纹病毒RNA干涉载体pMCG161+/-B和pCMBIA1301+/-B。本发明为植物抗病基因工程提供了一种干扰病毒基因表达载体及其构建方法与应用,为转基因技术及RNA干扰在生物抗性育种中的应用提供了新的思路。将该载体转入水稻中,成功获得了抗病毒植株,实现了利用RNA干扰原理获得抗RBSDV水稻新材料的预期目标,为RNA干扰介导的植物抗性育种及基因工程提供了成功的实例,弥补了RNA干扰介导的RBSDV抗性在本领域研究中的空缺。