本发明公开了一种新型米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶的生产方法及其应用,具体涉及重组天冬氨酸蛋白酶、编码基因及其生产方法和应用。该重组天冬氨酸蛋白酶是由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成的蛋白质,所述重组天冬氨酸蛋白酶的编码基因是SEQ ID NO:2所示的DNA分子。将米黑根毛霉的天冬氨酸蛋白酶基因RmproA连接至巴斯德毕赤酵母GS115表达载体pPIC9K,并转化至毕赤酵母中诱导表达得到重组天冬氨酸蛋白酶。经5L发酵罐高密度发酵后,重组菌株在156h时最高产蛋白酶活力为3400U/mL,蛋白含量为6.42mg/mL。本发明提供的重组天冬氨酸蛋白酶能有效嫩化猪肉,降低剪切力,使肉质适口,能够有效水解动物及植物蛋白,制备低分子量多肽。