本发明公开ALS突变蛋白，其ALS1氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，ALS3氨基酸序列如SEQ ID No：4所示。本发明还公开编码该突变蛋白的核酸，含有该核酸的表达盒、重组载体或细胞。本发明还公开该突变蛋白、核酸、表达盒、重组载体或细胞在植物抗除草剂方面的应用。本发明还公开了获得具有除草剂抗性植物的方法以及抗性植物鉴定方法。本发明是在我国油菜中首次发现的双基因双突变位点的ALS抑制剂类除草剂乙酰乳酸合酶突变体；在田间喷施ALS抑制剂类除草剂苯磺隆和甲基二磺隆实验结果表明，含有本发明的ALS突变蛋白的油菜DS3在3‑4叶期施用16倍的杂草防治推荐使用浓度后，植株仍然正常生长发育和结实。
