The invention discloses a multi-layer cell freezing vial and method of obtention thereof. The method of obtention is a cell freezing and thawing process that avoids the need of incorporating new fresh medium to the thawed cells for the dilution of the cryoprotective agent. This is achieved by the previous freezing of an extra layer of culture medium in addition to the frozen cell solution containing said cryoprotective agent. At the time of thawing, the culture medium and the cell solution mix themselves, turning the concentration of said cryoprotective agent to a non-toxic dilution and achieving the effective exclusion of said cryoprotective agent from the living cells.La presente invención se refiere a un método de congelación de células o materiales similares a células, en concreto orgánulos celulares, membranas celulares o liposomas, o embriones no humanos, caracterizado porque dicho método comprende las etapas de: a) congelar una capa de medio de cultivo celular completo en un recipiente b) añadir sobre dicho medio de cultivo celular completo congelado una capa de dichas células o materiales similares a células o embriones no humanos en forma de una disolución, comprendiendo el medio de dicha disolución al menos un agente crioprotector en concentración adecuada y c) congelar el resultado de la etapa anterior para obtener un cuerpo congelado de doble capa con la disolución congelada de células o materiales similares a células o embriones no humanos en la parte superior o a) congela runa capa de células o materiales similares a células o embriones no humanos en forma de una disolución, comprendiendo el medio de dicha disolución al menos un agente crioprotector en concentración adecuada, en un recipiente b) añadir sobre dicha disolución congelada una capa de medio de cultivo celular completo y c) congelar el resultado de la etapa anterior para obtener un cuerpo congelado de doble capa con el medio congelado en la parte superior donde el volumen de dicha capa de di
