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一种基于重组腺病毒的表达载体及其构建方法
- 专利权人:
- 南方医科大学
- 发明人:
- 李婷婷,罗升学,王文敬,黎诚耀
- 申请号：
- CN201710814258.9
- 公开号：
- CN107574175A
- 申请日:
- 2017.09.11
- 申请国别(地区):
- CN
- 年份:
- 2018
- 代理人:
- 摘要：
- 本发明公开了一种制备腺病毒表达载体的方法,所述方法包括:以野生型腺病毒AdC6的基因组为基础,通过基因组直接克隆方法,删除E1编码区和E3编码区,在E1删除区插入I‑Ceu I和PI‑Sce I酶切位点,同时以人源腺病毒Ad5的ORF6替换AdC6的ORF6,提高了在人源肾胚细胞(293A)中包装重组病毒的成功率和包装出重组病毒的滴度,获得复制缺陷性的重组腺病毒表达载体。本发明通过直接分子克隆的方法,构建大片段质粒,方法简单,已操作,可以用于任何大片段载体的构建;本发明通过几次克隆连接可以构建完成腺病毒表达载体,步骤简单;本发明删除E1、E3区和替换Ad5 ORF6,都可以用通过PCR扩增DNA片段的过程中能够完成删除和替换;本发明在细菌水平筛选阳性克隆更加容易、快捷,而且缩短了腺病毒载体构建时间。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
