本发明公开了CD226胞外段蛋白抑制肿瘤的作用。所述CD226胞外段蛋白是由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成的蛋白。本发明的蛋白能与CD112和CD155分子结合,一方面可有效封闭CD226与靶细胞的结合位点,抑制NK细胞的细胞毒活性,可作为NK细胞的抑制剂,用于治疗自身免疫性疾病;另一方面,与肿瘤细胞表面的CD112或CD155分子结合之后,会对肿瘤细胞的增殖产生抑制作用。所以该蛋白可用于免疫功能较低的肿瘤病人中抑制肿瘤的增殖。并且由于该蛋白是人体天然蛋白,其极少引起机体的免疫反应。本发明涉及CD226胞外段蛋白在制备用于抑制肿瘤细胞增殖的药物中的应用。