本发明名称为一种大肠杆菌和乳酸杆菌穿梭载体的构建及应用。本发明涉及基因工程技术领域,目的在于构建一种大肠杆菌与乳酸杆菌之间的穿梭载体,该载体被命名为pZLT3,其包含有如序列表SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列。本发明的载体的突出优点在于:首次利用植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillus plantarum subsp.plantarum)Zhang-LL(保藏号为:CGMCC No.6936)菌株中天然质粒pZL3为骨架,其包含有如序列表SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。构建适用于大肠杆菌和乳酸杆菌的穿梭载体,这种载体在大肠杆菌和乳酸杆菌中都具有稳定遗传的特点。同时,由于乳酸菌天然质粒pZL3中包含乳酸菌细菌素蛋白表达的编码基因及全部调控基因,构建的穿梭载体可以直接用于在乳酸杆菌中表达乳酸菌细菌素蛋白。