The invention relates to the field of genetic engineering tools, methods and techniques for nucleic acid, gene or genome editing. Specifically, the invention concerns prokaryotic Argonaute (pAgo) polypeptides having nuclease activity against target DNA when pAgo is complexed with a DNA guide. The invention also provides expression vectors comprising nucleic acids encoding said polypeptides as well as compositions and kits for, and methods of cleaving and editing target nucleic acids in a sequence-specific manner. The polypeptides, nucleic acids, expression vectors, compositions, kits and methods of the invention allow site- specific modifications of genetic material, whether isolated from cells in vitro, or within cells in situ and as such may usefully find application in many fields of biotechnology, including, for example, synthetic biology, gene therapy and agricultural or microbial biotechnology.L'invention concerne le domaine des outils, méthodes et techniques du génie génétique, permettant l'édition d'acides nucléiques, de gènes ou de génomes. Plus particulièrement, l'invention concerne des polypeptides de protéines Argonaute (pAgo) de procaryotes possédant une activité nucléasique contre un ADN cible lorsque le pAgo est complexé avec un ADN guide. L'invention concerne également des vecteurs d'expression comprenant des acides nucléiques codant pour lesdits polypeptides, ainsi que des compositions, kits et méthodes pour le clivage et l'édition d'acides nucléiques cibles de façon spécifique à la séquence. Les polypeptides, acides nucléiques, vecteurs d'expression, compositions, kits et méthodes de l'invention permettent des modifications de matériel génétique spécifiques à un site donné, soit isolées à partir de cellules in vitro ou au sein de cellules in situ, et peuvent ainsi trouver une application utile dans de nombreux domaines de la biotechnologie, y compris, par exemple, pour la biologie synthétique, la thérapie génique et les biotechnologies agricole ou
