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运用CRISPR-Cas9系统敲除水稻MIRNA393b茎环序列的基因编辑方法
- 专利权人:
- 浙江大学
- 发明人:
- 边红武,韩凝,郭芾,房克,杨亦农,朱睦元
- 申请号：
- CN201610085619.6
- 公开号：
- CN105647962A
- 申请日:
- 2016.02.15
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2016
- 代理人:
- 周世骏
- 摘要：
- 本发明涉及水稻转基因材料的构建，旨在提供一种运用CRISPR-Cas9系统敲除水稻MIRNA393b茎环序列的基因编辑方法。包括：选择gRNA靶位点进行克隆和GG连接，扩增后酶切，再与pGREB32载体连接；然后转化大肠杆菌感受态细胞；将测序结果正确的质粒转化农杆菌，并介导转化水稻愈伤组织获得转基因植株，获得转基因阳性株系；收取T0代突变体植株种子，发苗，对T1代植株进行纯合体筛选；经miR393b表达检测为阴性的纯合株系，即为完全丧失miR393b茎环序列及其表达的水稻突变体。本发明能有效敲除小RNA的茎环序列，且可以制备同一小RNA家族不同成员的功能丧失突变体。该突变体植株进行扩繁大量种子，是成功获得研究水稻MIRNA393b基因功能的理想材料。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
