本发明公开了一种玉米雄性不育系的建立方法,所述方法包括将含有玉米花粉特异性启动子pPSP1以及与所述启动子可操作连接的EN1和EN2基因的反义片段的植物表达载体转化玉米,获得EN1和EN2基因在花粉中特异性沉默表达的玉米雄性不育系,其中所述的玉米花粉特异性启动子pPSP1具有SEQ ID NO.1所示的序列或是在严谨条件下能够与SEQ ID NO.1所示的序列发生杂交的且具有启动子活性的DNA序列。本发明使用玉米花粉特异性启动子pPSP1与花粉发育必需基因的反义基因连接,转化到植物中可使花粉发育必需的基因在花粉中沉默表达,产生花粉败育植株,且避免了目的基因在其他部位持续表达所带的不利影响,在植物的遗传改良和植物生物反应器研究方面将具有广阔的应用前景。