本发明公开了犬I型腺病毒亚单位疫苗及其制备方法。本发明提供了具有免疫原性的抗原蛋白，该抗原蛋白由犬I型腺病毒五邻体基底基因节段编码，编码基因的核苷酸序列为SEQ ID No.1所示，所编码蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.2所示。该抗原蛋白免疫性强，安全性好，能够有效保护犬抵御I型腺病毒的攻击，可以不用添加免疫佐剂，直接将该抗原蛋白作为犬I型腺病毒亚单位疫苗进行使用，注射小鼠体后能显著提高小鼠血清中特异性抗体ELISA效价，病毒中和抗体效价，提高脾脏T淋巴细胞增殖活性，证明抗原蛋白具有较好的免疫原性。用本发明亚单位疫苗免疫狐狸30天后攻毒CAdV‑1，狐狸的存活率为100％。
