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油菜原生质体的分离及转化方法
专利权人:
中国农业科学院油料作物研究所
发明人:
华玮,郑明,杨红丽,李晓康,刘婧琳
申请号:
CN201710916783.1
公开号:
CN107488675A
申请日:
2017.09.29
申请国别(地区):
中国
年份:
2017
代理人:
江丽丽`王敏锋
摘要:
本发明公开了一种油菜原生质体分离及转化方法,包括以下步骤:1、选取油菜子叶或真叶,去除下表皮;2、置入酶解液中酶解,酶解液配方为:1wt%纤维素酶,0.3wt%离析酶,0.5M甘露醇,20mM KCl,20mM pH为5.7的MES,10mM CaCl2,0.1wt%BSA;3、在酶解混合液中加入等体积的W5溶液低速离心去上清,加W5洗涤重悬,将重悬液加入到20wt%的蔗糖溶液中进行纯化,水平离心取上层绿色原生质体液层;4、离心去除W5溶液,用MMG溶液重悬原生质体沉淀;5、原生质体转化。本发明首次在油菜中建立了原生质体分离及转化方法,利用油菜原生质体为受体进行转化,黄色荧光蛋白YFP、萤光素酶Luc及海洋腔肠萤光素酶Ren能够成功表达。
来源网站:
中国工程科技知识中心
来源网址:
http://www.ckcest.cn/home/

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