The invention relates to a method for preparing transmembrane pH-gradient vesicles. This method includes the following steps: a) preparing vesicles made from at least one matrix substance in an aqueous medium having an osmolarity of not more than 200 mOsm/l. The matrix substance is chosen from the group consisting of amphiphilic lipids and amphiphilic block copolymers, b) transferring the vesicles into a basic or acidic buffer having an osmolarity being at least 200 mOsm/l higher than the osmolarity of the aqueous medium of step a) to apply an osmotic shock to the vesicles and to obtain buffer-filled vesicles and c) diluting a mixture of the aqueous medium and the basic or acidic buffer containing the buffer-filled vesicles by adding a neutralizing solution to obtain transmembrane pH-gradient vesicles suspended in a suspension buffer, which differs from the basic or acidic buffer in pH value.L'invention concerne un procédé de préparation de vésicules à gradient de pH transmembranaires. Ce procédé est caractérisé par les étapes suivantes consistant à : a) préparer des vésicules préparées à partir d'au moins une substance matricielle dans un milieu aqueux possédant une osmolarité inférieure ou égale à 200 mOsm/l, la substance de matrice étant choisie dans le groupe constitué de lipides amphiphiles et de copolymères séquencés amphiphiles, b) transférer les vésicules dans un tampon basique ou acide possédant une osmolarité supérieure d'au moins 200 mOsm/l à l'osmolarité du milieu aqueux de l'étape a) afin d'appliquer aux vésicules un choc osmotique et d'obtenir des vésicules remplies de tampon et c) diluer un mélange constitué du milieu aqueux et du tampon basique ou acide contenant les vésicules remplies de tampon par addition d'une solution de neutralisation afin d'obtenir des vésicules à gradient de pH transmembranaires en suspension dans un tampon de suspension, la valeur du pH du tampon de suspension étant différente de celle du tampon basique ou acide.
