本发明提供一种番鸭细小病毒(MDPV)和鹅细小病毒(GPV)双重实时荧光定量PCR检测引物及方法,其中,MDPV引物序列如下:上游引物P1:TAATGGTGGCAGGAATGCACAGTTC,下游引物P2:TGTTACCATGATGTCTGAAAT;GPV引物序列如下:上游引物P3:GAGGTAGACAGCAACAGAAA,下游引物P4:GCTCGTCCGTGACCATA。目前,还没有基于SYBR Green II的双重实时荧光定量PCR检测引物及方法可以同时将GPV各种基因亚型完全地和MDPV区分开来的相关研究报道和发明专利,本发明的建立可填补相关领域空白。