本发明公开了一种烟草天然抗性相关巨噬蛋白基因,其特征在于:所述的基因为NtNramp5,所述基因核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示,编码的氨基酸序列如SEQ NO.2所示。本发明还公开了基因NtNramp5在烟草镉转运中的运用以及克隆方法,具体步骤包括:包括以下步骤:(1)提取烟草RNA,利用反转录酶获得烟草第一链cDNA;(2)根据公共数据库NCBI中普通烟草NtNramp5基因序列设计合成特异性引物,以cDNA为模板,进行PCR扩增;(3)纯化PCR产物与载体连接,转化大肠杆菌感受态细胞;(4)挑取克隆,通过PCR筛选阳性克隆,提取质粒,测序。通过降低烟草镉转运基因Nramp5的表达量,从而降低镉从烟草根部向烟草地上部分的转运效率,从而降低烟草叶片的镉含量,为烟草品种的低镉化提供坚实基础。