The present invention provides a process for periplasmic expression of a bacterial toxoid comprising the steps of: a) growing a culture of a gram negative host cell in a fermentation medium, wherein the host cell is transformed with a polynucleotide, and wherein the polynucleotide encodes the bacterial toxoid and a periplasmic signal sequence； or providing a gram negative host cell wherein the host cell is transformed with a polynucleotide, the polynucleotide encodes the bacterial toxoid and a periplasmic signal sequence and wherein the gram negative host cell comprises the bacterial toxoid expressed in the periplasm； a(i)) inducing expression of the bacterial toxoid； b) maturing the host cell, wherein the maturing step comprises: I) subjecting the host cell to a pH shock； II) incubating the host cell with no feed addition； and/or III) subjecting the host cell to a temperature below &minus；20° C.； and c) extracting the bacterial toxoid from the host cell wherein the extraction process comprises osmotic shock.本発明は細菌トキソイドのペリプラズム発現のためのプロセスを提供するが、そのプロセスは以下のステップ、すなわち：a) 発酵培地中でグラム陰性宿主細胞培養物を増殖させるステップであって、この宿主細胞はポリヌクレオチドで形質転換されており、そのポリヌクレオチドが細菌トキソイドおよびペリプラズムシグナル配列をコードしているステップ；またはグラム陰性宿主細胞を提供するステップであって、この宿主細胞はポリヌクレオチドで形質転換され、そのポリヌクレオチドが細菌トキソイドおよびペリプラズムシグナル配列をコードしており、このグラム陰性宿主細胞がペリプラズムで発現される細菌トキソイドを含有するステップ；a(i)) 細菌トキソイドの発現を誘導するステップ；b) 宿主細胞を成熟させるステップであって、その成熟ステップが：I) 宿主細胞をpHショックにさらすこと；II) 宿主細胞を供給添加なしでインキュベートすること；および/またはIII) 宿主細胞を－20℃より低い温度にさらすこと、を含んでなるステップ；ならびにc) 宿主細胞から細菌トキソイドを抽出するステップであって、この抽出工程が浸透圧ショックを含むステップ、を含んでなるものである。【選択図】なし
