targeted disruption of a specific gene and its subsequent restoration in mandatory intracellular bacteria remains extremely challenging due to its absolute need to reside within a host cell to replicate. here, targeted allele-exchange mutations were created to inactivate two genes and then to restore one of the two genes of a rickettsial pathogen, ehrli-chia chaffeensis. these methods were later also successfully used in ehrlichia canis and anaplasma phagocyophilum. the resulting mutated pathogens are useful in immunogenic compositions to reduce the incidence or severity of infection with rickettsial pathogens.interrupção alvejada de um gene específico e sua restauração subsequente em bactérias intracelulares obrigatórias permanece extremamente desafiadora devido à sua necessidade absoluta de residência dentro de uma célula hospedeira para se replicar. aqui, mutações de troca alélica alvejadas foram criadas para inativar dois genes e depois para restaurar um dos dois genes de um patógeno riquetsiano, ehrli-chia chaffeensis. estes métodos depois também foram utilizados com êxito em ehrlichia canis e anaplasma phagocyophilum. os patógenos mutados resultantes são úteis em composições imunogênicas para reduzir a incidência ou severidade de infecção com patógenos riquetsianos.
