本发明公开了一组用于H5亚型禽流感病毒检测的RT-LAMP引物组、检测方法及应用,所述的引物组由一对外引物,一对内引物和一对环引物组成;所述外引物对序列分别如SEQ ID No.1、2所示,内引物对序列分别如SEQ IDNo.3、4所示,环引物对序列分别如SEQ ID No.5、6所示。本发明的引物组可用于制备H5亚型禽流感病毒检测的试剂盒,所述试剂盒包括:Reaction Mix;Enzyme Mix;Distilled Water;荧光检测试剂以及本发明的引物组。本发明检测试剂盒具有用样少、特异性强、敏感性高、快速准确等特点,为H5亚型禽流感的防控预警机制提供了简捷、有效的早期快速诊断途径。