Methods for preparation of a heat stable hemoglobin based oxygen-carrier-containing pharmaceutical composition such that beta-beta cross-linking is favored are provided. Using the methods of the present invention, the oxygen affinity of the resultant molecule can be controlled so that hemoglobin based oxygen carriers tailored for specific applications can be produced. Lower oxygen affinity crosslinked hemoglobin is useful for applications requiring rapid tissue oxygenation (e.g. hemorrhagic shock) while higher oxygen affinity cross-linked hemoglobin is useful for applications requiring a slower rate of oxygenation (e.g. cancer adjunct therapy). A highly purified and heat stable crosslinked non-polymeric tetrameric hemoglobin having beta- beta cross-linking of greater than 40-60% and suitable for use in mammals without causing renal injury and vasoconstriction is produced. A high temperature and short time (HTST) heat processing step is performed to effectively remove any undesired dimeric hemoglobin, non- crosslinked tetrameric hemoglobin, and plasma protein impurities.La presente invención se refiere a métodos para la preparación de una composición farmacéutica que contiene portador de oxígeno a base de hemoglobina estable al calor tal que se favorece la reticulación beta-beta. Usando los métodos de la presente invención, se puede controlar la afinidad a oxígeno de la molécula resultante de modo que se producen portadores de oxígeno a base de hemoglobina adaptados para aplicaciones específicas. La hemoglobina reticulada de menor afinidad a oxígeno es útil para aplicaciones que requieren rápida oxigenación de tejido (por ejemplo, choque hemorrágico) en tanto que la hemoglobina reticulada de mayor afinidad a oxígeno es útil para aplicaciones que requieren una menor velocidad de oxigenación (por ejemplo, terapia adjunta de cáncer). Se requiere una hemoglobina tetramérica no polimérica reticulada estable al calor y altamente purificada que tiene reticulación beta-beta
