本发明公开了人卵透明带蛋白4中的表位肽及其应用。具体地,本发明人提供了一种来自人卵透明带蛋白-4(人ZP4蛋白227位-463位)的分离的抗原短肽,所述短肽的结构如式I所示:X1-X-X2(式I),并满足以下特征:(a)式I中X为6-7个氨基酸的核心片段;(b)式I中X1、X2的氨基酸个数总和≤2个;(c)所述的核心片段的序列选自SEQ ID NO.:1-6;和(d)所述的短肽具有与抗人ZP4C抗体结合的活性;其中,“-”表示肽键或肽接头。本发明表位肽可组合应用于检测样品中抗人ZP4蛋白各抗体的存在或含量,从而可高特异性高灵敏度地诊断ZP自身免疫引起的妇女不孕症,此外,本发明表位肽还可用于制备具有安全有效优点的重组人ZP多表位肽避孕疫苗。