JAMES JEFFERSON SMITH,スミス，ジェイムス，ジェファーソン,DEREK JANTZ,ジャンツ，デレック,スミス,ジェイムス,ジェファーソン,ジャンツ,デレック
申请号：
JP2016193485
公开号：
JP2017051190A
申请日:
2016.09.30
申请国别(地区):
JP
年份:
2017
代理人:
摘要：
PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a non-naturally-occurring meganuclease in which a pair of enzyme subunits having specificity for different recognition sequence half-sites is joined into a single polypeptide to form a functional heterodimer with a non-palindromic recognition sequence.SOLUTION: The present invention provides a recombinant single-chain meganuclease comprising: (a) a first LAGLIDADG subunit having a first recognition half-site and comprising a polypeptide having at least 85% sequence identity to residues of wild-type I-CreI meganuclease； and (b) a second LAGLIDADG subunit having a second recognition half-site and comprising a polypeptide having at least 85% sequence identity to residues of wild-type I-CreI meganuclease. Here, the first and the second LAGLIDADG subunits are covalently bound to a polypeptide linker, and are capable of recognizing and cleaving a non-palindromic DNA sequence provided as a hybrid between the first recognition half-site and the second recognition half-site.SELECTED DRAWING: Figure 1【課題】異なる認識配列半部位に対して特異性を持つ一対の酵素サブユニットが単鎖ポリペプチドに結合され、非パリンドローム認識配列を持つ機能的へテロ二量体を形成した、非天然由来のメガヌクレアーゼの提供。【解決手段】（ａ）野生型Ｉ－ＣｒｅＩメガヌクレアーゼの残基と少なくとも８５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含み、第１認識半部位を有する第１ＬＡＧＬＩＤＡＤＧサブユニットと、（ｂ）野生型Ｉ－ＣｒｅＩメガヌクレアーゼの残基と少なくとも８５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含み、第２認識半部位を有する第２ＬＡＧＬＩＤＡＤＧサブユニットと、を含み、前記第１及び第２ＬＡＧＬＩＤＡＤＧサブユニットは、ポリペプチドリンカにより共有的に結合され、前記第１認識半部位及び前記第２認識半部位のハイブリッドである非パリンドロームＤＮＡ配列を、認識及び切断することができる、組換え単鎖メガヌクレアーゼ。【選択図】図１
