本发明公开了TOP2A基因异常检测探针、试剂盒以及方法,所述试剂盒包括有标记荧光染料的、针对TOP2A基因的第一组探针和针对人类17号染色体着丝粒区域的第二组探针,所述第一组探针为选自SEQ ID NO.41—SEQ ID NO.50中的至少一条探针,所述第二组探针为选自SEQ ID NO.51—SEQ ID NO.60中的至少一条探针;上述两组探针所标记的荧光染料颜色不一样。本发明所提供的TOP2A基因异常检测试剂盒中的FISH探针,不含有重复序列,能够避免交叉反应,与染色体中TOP2A目标检测片段进行识别杂交,具有准确性高,特异性好、及假阳性低的优点。