The present invention provides a method for preparing a human stem cell culture medium containing a cell growth regulatory protein. The method for preparing a human stem cell culture solution includes a first step of subculturing human stem cells in a subculture medium containing human platelet lysates. The subculture medium is removed and a serum-free culture medium (Serum Free Medium), a second step of culturing the human stem cells, and a third step of filtering the supernatant of the serum-free culture medium with a filter to obtain a stem cell culture solution containing a cell growth regulatory protein.본 발명은 세포성장조절 단백질을 포함하는 인간줄기세포 배양액의 제조방법을 제공한다. 인간줄기세포 배양액의 제조방법은 인간줄기세포를 인간 혈소판 용해물(human Platelet Lysates)을 포함하는 계대배양용 배지에서 계대배양 하는 제1 단계, 상기 계대배양용 배지를 제거하고 무혈청 배양배지(Serum Free Medium)에서 상기 인간줄기세포를 배양하는 제2 단계 및 상기 무혈청 배양배지의 상등액을 필터로 여과하여 세포성장조절 단백질을 포함하는 줄기세포 배양액을 얻는 제3 단계를 포함한다.