A human limbal epithelial stem xenobiotic free cell culture system is provided. The cell culture system typically includes a cell culture media comprising isoproterenol, Human Epidermal Growth Factor (EGF), N2 supplement, hydrocortisone, and an antibiotic. This cell culture media can efficiently propagate undifferentiated LSCs in the absence xenobiotic cells. These systems provide an optimized way to culture LSCs for use in human transplantation (e.g. in patients suffering from limbal stem cell deficiency) by minimizing the risk of cross-contamination and/or reagent toxicity to transplant recipients.L'invention concerne un système de culture cellulaire sans xénobiotique de cellules épithéliales limbiques humaines. Le système de culture cellulaire comprend typiquement un milieu de culture cellulaire comprenant de l'isoprotérénol, le facteur de croissance épidermique (EGF) humain, un supplément de N2, de l'hydrocortisone et un antibiotique. Ce milieu de culture cellulaire peut faire croître de façon efficace des CSL indifférenciées en l'absence de cellules xénobiotiques. Ces systèmes fournissent une manière optimisée de cultiver des CSL destinées à être utilisées dans une transplantation chez l'humain (par exemple chez des patients souffrant d'une déficience en cellules souches limbiques) en minimisant le risque de contamination croisée et/ou de toxicité de réactifs chez le receveur de la greffe.