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RK‑13细胞HB基因敲除稳定株的构建方法
- 专利权人:
- 中国农业科学院上海兽医研究所
- 发明人:
- 刘光清,谭永贵,刘腾,朱杰,陈宗艳,李传锋
- 申请号：
- CN201710200878.3
- 公开号：
- CN106987560A
- 申请日:
- 2017.03.29
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2017
- 代理人:
- 郭国中`陈少凌
- 摘要：
- 本发明公开了一种RK‑13细胞HB基因敲除稳定株的构建方法；所述方法包括如下步骤：设计一对互补的靶向家兔HB基因第二个外显子的sgRNA，以pSpCas9(BB)‑2A‑Puro(PX459)V2.0质粒为载体，构建重组真核表达质粒；经测序鉴定后，将重组真核表达质粒共转染进入RK‑13细胞中，使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选，分离单克隆细胞进行培养；用测序鉴定敲除效果。本发明构建的质粒携带有化脓性链球菌II型CRISPR/Cas9系统的Cas9核酸内切酶基因；CRISPR/Cas9基因编辑技术成功永久性敲除了RK‑13细胞HB基因，获得HB敲除稳定细胞株，为研究HB基因的功能打下坚实基础。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
