本发明涉及一种粉棒束孢特异性检测试剂盒及其检测方法,试剂盒包括Tar‑1F/Tar‑1R引物对,其中Tar‑1F/Tar‑1R引物对序列如SEQ ID NO.41和SEQ ID NO.42所示,该引物能够特异识别粉棒束孢,本发明还公开了土壤样品中粉棒束孢污染的方法,土壤样品检测是通过清洗液清洗,再用裂解液、溶菌酶和蛋白酶K处理,经纯化后用于检测,该方法去除了土壤中腐殖酸,防止了因腐植酸螯合Mg2+、HiFi酶或与DNA共价结合对检测结果的影响,准确度好、灵敏度高,还公开了虫体中粉棒束孢污染检测的方法,对冬虫夏草的人工培育过程中粉棒束孢检测具有重要意义。