一种用于检测猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒及其混合感染的试剂盒和使用所述试剂盒的检测方法,所述试剂盒包括10×PCR buffer、dNTP、DMSO、Taq酶、阳性对照试样以及选自SEQID NO:1至SEQ ID NO:8序列的引物混合物、SEQ ID NO:1至SEQ IDNO:8序列的5’端和/或3’端延长序列的引物混合物、与SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:8序列同源性大于85%的序列的引物混合物或者与SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:8序列碱基互补的序列的引物混合物中任一种的引物。所述试剂盒和检测方法具有快速高效、稳定性好、准确性高和敏感性高等优势。