РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pPicZαA/BChE, СОДЕРЖАЩАЯ ГЕН БУТИРИЛХОЛИНЭСТЕРАЗЫ ЧЕЛОВЕКА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БУТИРИЛХОЛИНЭСТЕРАЗЫ ЧЕЛОВЕКА В МЕТИЛОТРОФНЫХ ДРОЖЖАХ PICHIA PASTORIS ДЛЯ ТЕРАПИИ ОТРАВЛЕНИЙ ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИМИ ТОКСИНАМИ
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) (RU)
发明人:
Белогуров Алексей Анатольевич (RU),Бобик Татьяна Владимировна (RU),Габибов Александр Габибович (RU),Мокрушина Юлиана Анатольевна (RU),Пономаренко Наталья Александровна (RU),Смирнов Иван Витальевич (RU
申请号：
RU2015149230
公开号：
RU2015149230A
申请日:
2015.11.17
申请国别(地区):
RU
年份:
2016
代理人:
摘要：
1. Recombinant DNA plasmid pPicZαA / BChE, coding for human BuChE consisting of pPicZαA plasmid and the nucleotide sequence of the synthetic gene of human BuChE comprising inducible alcohol oxidase gene promoter AOX1 yeast P. pastoris wild type native terminator and polyadenylation signal AOX1 gene Sh ble gene sequence the product of which provides resistance to the antibiotic Zeocin transformants, and the nucleotide sequence of the signal peptide of the alpha-factor from S.cerevisiae, required for secretion Expro essiruemyh products into the culture sredu.2. Producing strain P. pastoris GS115 / BChE / a2, obtained by transforming P. pastoris cells GS115 line recombinant plasmid DNA pPicZαA / BChE.3. A method for producing human butyrylcholinesterase based producer strain GS115 / BChE / a2 under conditions of acidity of the culture medium pH of 7.6, the starting optical density of 3.0 pu mode and adding methanol: the starting concentration of 0.5% methanol, 1 day without making methanol (1 day) after 48 hours - 0.1% (day 2), after 72 hours, and further at 0.2% (3-7 days).1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pPicZαA/BChE, кодирующая БуХЭ человека, состоящая из плазмиды pPicZαA и нуклеотидной последовательности синтетического гена БуХЭ человека, содержащая индуцибельный промотор гена алкогольоксидазы АОХ1 дрожжей P. pastoris дикого типа, нативный терминатор и сигнал полиаденилирования АОХ1 гена, последовательность гена Sh ble, продукт которого обеспечивает устойчивость трансформантов к антибиотику зеоцину, а также нуклеотидную последовательность сигнального пептида альфа-фактора из S.cerevisiae, необходимую для секреции экспрессируемых продуктов в культуральную среду.2. Штамм-продуцент P. pastoris GS115/BChE/a2, полученный в результате трансформации клеток P. pastoris линии GS115 рекомбинантной плазмидной ДНК pPicZαA/BChE.3. Способ получения бутирилхолинэстеразы человека на основе штамма-продуцента GS115/BChE/a2 в условиях кислотности культуральной среды рН 7.6, стартовой
