本发明涉及一种拟穴青蟹抗病因子SpALF6单核苷酸突变体及其制备方法和应用。本发明涉及水产动物新型天然药物与饲料添加剂开发和应用技术领域,具体是一种拟穴青蟹抗病因子SpALF6单核苷酸突变体SpALF6‑M,其全长核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示,全长氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。本发明还提供SpALF6‑M的制备方法和应用。本发明制备的SpALF6‑M对真菌和病原性细菌(特别是耐药性弧菌)具有明显的抑制和杀伤作用,表明其在抗微生物感染新药和新型抗病饲料添加剂的开发和应用方面具有非常诱人的应用前景。