本发明公开了一种基于ABCC1基因的小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的实时荧光定量PCR检测方法及其试剂盒,所述试剂盒包含以下靶标基因特异引物序列:正向引物如SEQ ID NO.2所示,反向引物如 SEQ ID NO.3所示。本发明方法,需人力及样品量少,检测数量大,而且灵敏度高、特异性强、快速简便和准确可靠,因而能有效的检测小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac的抗性水平,适合于小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的早期快速诊断,同时可用于田间小菜蛾Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的实时监控和预警预报,应用前景广泛。