本发明属于生物免疫分析技术领域,具体涉及一株具有阻断活性的抗尼帕病毒G蛋白的单克隆抗体及其应用。本发明经过密码子优化方法克隆得到尼帕病毒G蛋白基因,该蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1中第898‑1806位碱基位所述的序列,其蛋白质序列如SEQ ID NO:2所示。本发明提供了一种分泌抗尼帕病毒G蛋白且具有一定阻断活性的单克隆抗体的杂交瘤细胞株15‑D11(中国典型培养物保藏中心保藏编号为CCTCC NO.C2016207)。用原核表达并纯化的尼帕病毒G蛋白免疫BALB/c小鼠,筛选出一株能稳定分泌抗尼帕病毒G蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。本发明制备的单抗可用于动物免疫分析技术领域。