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Purification of recombinant adeno-associated virus particles including an affinity purification step
专利权人:
アソシエーション フランセーズ コントル レス ミオパシーズ;インスティチュート ナショナル デ ラ サンテ エ デ ラ ルシェルシュ メディカル (インセルム);インスティチュート ナショナル デ ラ サンテ エ デ ラ ルシェルシュ メディカル (インセルム);ユニバーシティ デ ナント;シーエイチユー ナント
发明人:
ブルメント,ニコル,ブルメント,ニコル
申请号:
JP2017559915
公开号:
JP2018507707A
申请日:
2016.02.09
申请国别(地区):
JP
年份:
2018
代理人:
摘要:
The present invention is a method for obtaining purified recombinant adeno-associated virus particles (rAAV), which is a step of performing (a) depth filtration of a starting material obtained in advance from cells producing rAAV particles. The starting material is selected in the group comprising cell lysate and culture supernatant, thereby providing a clarified composition containing rAAV; and (b) subjecting the clarified composition containing rAAV to affinity purification. A step of providing a first rAAV enriched composition, and (c) at least one time of (c1) a salt gradient (preferably linear). A step of anion exchange chromatography on a chromatographic support, wherein elution is carried out using a salt gradient) and the fraction containing rAAV is recovered, whereby Two rAAV enriched compositions are provided; or (c2) density gradient centrifugation, wherein the rAAV containing fraction is collected, thereby providing a second rAAV enriched composition; And (d) subjecting the second rAAV concentrated composition to a tangential flow filtration step, whereby purified recombinant adeno-associated virus particles (rAAV) are provided. Will be described. [Selection figure] None本発明は、精製された組換えアデノ随伴ウイルス粒子(rAAV)を得るための方法であって、(a)rAAV粒子を産生する細胞から事前に取得された出発材料の深層ろ過を行う工程であって、前記出発材料が、細胞溶解物および培養上清を含む群において選択される、それによりrAAV含有清澄化組成物が提供される工程と、(b)rAAV含有清澄化組成物をアフィニティー精製のステップに供する工程であって、それにより第1のrAAV濃縮組成物が提供される工程と、(c)第1のrAAV濃縮組成物を少なくとも1回、(c1)塩勾配(好ましくは直線的な塩勾配)を用いて溶出が行われrAAV含有画分が回収される、クロマトグラフィー担体上における陰イオン交換クロマトグラフィーのステップであって、それにより第2のrAAV濃縮組成物が提供されるステップ;または(c2)密度勾配遠心分離のステップであって、rAAV含有画分が回収される、それにより第2のrAAV濃縮組成物が提供されるステップ;に供する工程と、(d)第2のrAAV濃縮組成物をタンジェンシャルフローろ過のステップに供する工程であって、それにより、精製された組換えアデノ随伴ウイルス粒子(rAAV)が提供される工程と、を含む方法を説明する。【選択図】なし
来源网站:
中国工程科技知识中心
来源网址:
http://www.ckcest.cn/home/

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