Federalnoe gosudarstvennoe byudzhetnoe uchrezhdenie nauki Institut bioorganicheskoj khimii im. akademikov M.M. Shemyakina i YU.A. Ovchinnikova Rossijskoj akademii nauk (IBKH RAN)
发明人:
Lomakin Yakov Anatolevich (RU),Ломакин Яков Анатольевич (RU),Stepanov Aleksej Vyacheslavovich (RU),Степанов Алексей Вячеславович (RU),Belogurov Aleksej Anatolevich (RU),Белогуров Алексей Анатольевич (
申请号：
RU2018147197
公开号：
RU0002724714C1
申请日:
2018.12.28
申请国别(地区):
RU
年份:
2020
代理人:
摘要：
FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: invention relates to biotechnology, specifically to a method for conjugating a recombinant constant fragment of a human immunoglobulin heavy chain (Fc) and a peptoid analogue of autoantigen MOG35-55 (AMogP3). Chemical conjugation of Fc with a bifunctional cross-linker linker NHS-PEG2-maleimide is carried out at a ratio of reagents of 1:10 and an optimum length of the cross-linking reagent of 17.6 angstroms. Obtained fragment Fc-linker is purified from unreacted linker by means of desalting chromatographic column. Chemical conjugation of peptide AMogP3 carrying a free thiol group and a Fc-linker fragment are carried out at the ratio of reagents Fc-linker: peptoid = 1:2. Fc-linker: peptoid mixture is concentrated with cooling to 4 °C. Obtained bifunctional agent Fc-linker-peptoid module AMogP3 is purified from unreacted peptoid AMogP3 by gel filtration chromatography. Duration of one complete cycle of extraction and purification is 3 hours. Output of target product is 61.2 %. Invention improves efficiency of conjugation of peptoid analogue of autoantigen MOG35-55 with a constant domain of a heavy chain of human immunoglobulin.EFFECT: prepared conjugate is suitable for multiple sclerosis therapy.1 cl, 4 dwg, 1 tbl, 4 exИзобретение относится к биотехнологии, а именно к способу конъюгации рекомбинантного константного фрагмента тяжелой цепи иммуноглобулина человека (Fc) и пептоидного аналога аутоантигена MOG35-55 (AMogP3). Осуществляют химическую конъюгацию Fc с бифункциональным кросс-сшивающим линкером NHS-PEG2-малеимид при соотношении реагентов 1:10 и оптимальной длиной кросс-сшивающего реагента 17.6 ангстрем. Очищают полученный фрагмент Fc-линкер от непрореагировавшего линкера с помощью обессоливающей хроматографической колонки. Проводят химическую конъюгацию пептоида AMogP3, несущего свободную тиольную группу, и фрагмента Fc-линкер при соотношении реагентов Fc-линкер : пептоид = 1:2. Концентрируют смесь Fc-линкер : пептоид с охлаждением
