本发明提供一种利用细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4,CTLA-4)作为诊断标记物鉴别活动性结核分枝杆菌感染与潜伏性结核分枝杆菌感染的诊断试剂盒以及使用该诊断试剂盒鉴别结核分枝杆菌活动性与潜伏性感染的方法。所述诊断试剂盒包括CTLA-4、CD3、CD4、CD25、FoxP3荧光抗体,以及红细胞裂解液、破膜液、洗涤缓冲液、磷酸盐缓冲液、胎牛血清、固定液和流式管。采用本发明检测患者外周静脉血CTLA-4的表达量,可用于活动性结核分枝杆菌感染与潜伏感染的鉴别诊断,而且有较高的敏感性和准确度,可提为临床鉴别诊断提供有力依据。