本发明公开了检测甘蓝型油菜抗磺酰脲类除草剂基因BnALS3R的引物与应用,属于分子育种领域。引物SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2用于检测甘蓝型油菜抗磺酰脲类除草剂基因BnALS3R的方法为:以甘蓝型油菜总DNA作为模板,加入引物进行PCR扩增;PCR产物进行限制性核酸内切酶BsrDI消化;酶切产物用来区分含抗性基因BnALS3R的纯合型油菜、含抗性基因BnALS3R的杂合型油菜和不含抗性基因BnALS3R的纯合型油菜。本发明能快速、准确地检测油菜植株是否含有抗性基因BnALS3R,更精确检测所含除草剂基因是纯合型还是杂合型,从而快速有效地实现培育抗除草剂油菜新品种的育种目标。