本发明公开了一种O型口蹄疫病毒样颗粒及其制备方法和应用。所述的O型口蹄疫病毒样颗粒是由O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP0、VP1以及优化后的VP3结构蛋白组装而成,其中VP1的基因序列为SEQ ID NO.1所示,VP0的基因序列为SEQ ID NO.2所示,优化后的VP3的基因序列为SEQ ID NO.3所示。本发明尝试将口蹄疫病毒结构蛋白VP3的部分区段进行人工缺失,结果显示,VP3基因经人工缺失后,VP3目的蛋白的表达量较突变前提高了20%,病毒样颗粒的组装效率提高了15%左右,且动物试验结果表明其免疫原性良好,与未缺失VP3组装得到的VLPs无显著差别。本发明的提出为口蹄疫疫苗的研制提供了一种新的技术手段。