A method for producing an epithelial cell sheet comprising culturing cells derived from oral mucosal epithelial cells on a substrate in a serum-free medium, wherein the serum-free medium comprises (i) EGF protein or KGF protein, (ii) B-And (iii) a ROCK inhibitor.구강 점막 상피 세포 유래의 세포를, 무혈청 배지 중, 기재 상에서 배양하는 공정을 포함하는 상피 세포 시트의 제조 방법으로서, 상기 무혈청 배지가 (ⅰ) EGF 단백질 또는 KGF 단백질, (ⅱ) B-27 서플리먼트, 및 (ⅲ) ROCK 저해제를 포함하는 무혈청 배지인, 방법.