抗菌肽buforinⅡ和猪INF-α融合表达毕赤酵母菌及制备方法和应用

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专利权人:

中国科学院亚热带农业生态研究所

发明人:

唐志如,冯泽猛,印遇龙,张友明

申请号：

CN200910273232.3

公开号：

CN101717737A

申请日:

2009.12.11

申请国别(地区):

中国

年份:

2010

代理人:

王敏锋

摘要：

本发明公开了一种抗菌肽buforin II和猪INF-α融合表达毕赤酵母菌及制备方法和应用，毕赤酵母菌(Pichia pastoris FZM2009，CCTCC NO：M209259)。其步骤是：A、表达盒PAOX1-αFactor-IFNα-6×His-bufforin II-Zeocinr的构建；B、表达工程菌Pichia pastoris FZM2009的构建，经抗生素Zeocin筛选和PCR鉴定得到工程菌。C、融合蛋白的制备步骤是：1)在含有100μg/ml Zeocin的YPD平板上复苏；2)挑单克隆接种于含有YPD培养基中，振摇培养；3)将一体积培养物接种于十体积发酵培养基培养；4)离心，获取上清；5)加一倍体积上样缓冲液上清中，电泳检测；6)上清液过分子筛凝胶柱，收集组分；7)冷冻干燥收集的组分，得到融合蛋白；8)用肠激酶酶切融合蛋白获得buforin II和IFNα。融合表达融合蛋白buforin II和INF-α应用猪饲料。方法易行、操作简便、表达量高、成本低廉、生物学活性强。

来源网站：

中国工程科技知识中心

来源网址：

http://www.ckcest.cn/home/