本发明公开了杨树菇凝集素AAL-2及其编码基因、其制备方法和应用。本发明采用亲和层析方法从杨树菇(Agrocybeaegerita)总蛋白中分离得到凝集素蛋白AAL-2,其氨基酸序列为SEQ ID NO:2所示,编码该蛋白的核苷酸序列为SEQ ID NO:1所示。细胞试验表明,本发明所分离杨树菇凝集素AAL-2具有优异的杀伤肿瘤细胞活性,能够引起肝癌细胞发生显著性的凋亡。动物实验表明,AAL-2对肿瘤有较好的治疗效果。糖芯片技术检测结果显示,AAL-2优先结合以N-乙酰葡萄糖胺为末端的糖或糖蛋白,可将其作为检测与N-乙酰葡萄糖胺相关的病症试剂或作为检测N-乙酰葡萄糖胺相关糖结构的试剂。