GHETTI, Andrea,MIRON, Yannick,GHETTI, Claudio,MILLER, Paul
申请号：
USUS2018/028421
公开号：
WO2018/195342A1
申请日:
2018.04.19
申请国别(地区):
US
年份:
2018
代理人:
摘要：
The present invention provides methods of identifying and distinguishing different types of nerve cells in ex vivo cell culture, the method comprising the steps of: a) culturing somato-sensory nerve cells ex vivo, b) loading the nerve cells with a calcium, sodium, or voltage-sensitive indicator or expressing a genetically encoded calcium, sodium, or voltage-sensitive indicator, c) pulsing the nerve cells with an electrical train of bipolar square waves at two different voltages and two different frequencies； wherein the first voltage is 10 V/cm or less (low voltage) and the second voltage is between 12 and 20 V/cm (high voltage)； and wherein the first frequency is 5 Hz or less (low frequency) and the second frequency is between 15 and 20 Hz (high frequency), and d) detecting activation of the nerve cell by measuring the changes in the signal intensity of the indicator, wherein low voltage and low frequency activation indicates a first type of cell and activation detected only at high voltage indicates a second type of cell.La présente invention concerne des procédés d'identification et de distinction de différents types de cellules nerveuses dans une culture cellulaire ex vivo, le procédé comprenant les étapes suivantes : a) culture de cellules nerveuses somato-sensorielles ex vivo, b) chargement des cellules nerveuses avec un indicateur sensible au calcium, au sodium ou à la tension ou expression d'un indicateur sensible au calcium, au sodium ou à la tension génétiquement codé, c) stimulation des cellules nerveuses à l'aide d'un train électrique d'ondes carrées bipolaires à deux tensions différentes et deux fréquences différentes ； où la première tension est inférieure ou égale à 10 V/cm (basse tension) et la seconde, comprise entre 12 et 20 V/cm (haute tension) ； et la première fréquence est de 5 Hz ou moins (basse fréquence) et la seconde, comprise entre 15 et 20 Hz (haute fréquence) ； et d) détection de l'activation de la cellule nerveuse par mesure des variatio
