本发明涉及医学生物抗体技术领域,提供了一种抗狂犬病病毒单克隆抗体、制备方法及用途。该单克隆抗体的轻链可变结构域包含高变区CDR1、CDR2、CDR3,氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1~3所示;重链可变结构域包含高变区CDR1'、CDR2'、CDR3',氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4~6所示。经检测,该单克隆抗体具有高体外中和活性、高中和指数,抗原表位靠近狂犬病病毒糖蛋白中和II表位或与位于中和II表位内,其针对的关键氨基酸位点一个为aa205,另一个由37、194和204位氨基酸共同构成,对街毒株有很好的中和能力;此外,其Tm值为70.58℃,具有较好的热稳定性,提示有可能作为抗狂犬病病毒被动免疫制剂产品或开发体外诊断试剂盒。