The present invention is an invention in the field of methods for genome manipulation based on the type II CRISPR system, especially methods for improved specificity and potential potential offsite. The method is based on the use of single or multiple crRNA and Cas9 nickase constructs with two different targets that reduce the risk of off-site cleavage occurring. The present invention also relates to polypeptides, polynucleotides, vectors, compositions, therapeutic applications related to the methods described herein.本発明は、II型CRISPRシステムに基づくゲノム操作のための方法、特に特異性の改善および潜在的オフサイトの低減のための方法の分野の発明である。本方法は、オフサイト切断が生じるリスクを低下させる2つの異なる標的を持つ単一または複数のcrRNAおよびCas9のニッカーゼ構造体の使用に基づく。本発明はまた、本明細書に記述の方法に関連するポリペプチド、ポリヌクレオチド、ベクター、組成物、治療への応用にも関する。
