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家蚕BmNPV Polh+Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的构建方法
- 专利权人:
- 浙江大学
- 发明人:
- 相兴伟,吴小锋,于少芳,杨锐
- 申请号：
- CN200910154607.4
- 公开号：
- CN101724652A
- 申请日:
- 2009.11.19
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2010
- 代理人:
- 林怀禹
- 摘要：
- 本发明公开了一种家蚕BmNPV Polh+Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的构建方法：以家蚕野生型BmNPV基因组DNA为模板，分别以P10-upF/P10-upB和P10-downF/P10-downB为引物PCR扩增得p10-up和p10-down，处理后插入到pUC19中的BamHI-PstI-HindIII位点，得重组质粒pUC19-p10-up-down；利用pUC19-p10-up-polh-down、脂质体lipofectin和MilliQ H2O制备DNA-Lipofectin混合液，加入到BmN细胞中培养；收集转染后的细胞上清，接种BmN细胞，回收多角体；从多角体中抽提病毒DNA并电转化DH10β感受态细胞，筛选蓝斑培养；对PCR阳性的菌斑培养后抽提大分子DNA转染入BmN细胞；从AcMNPV Bac-to-Bac的DH10Bac培养菌中分离获得辅助质粒；将辅助质粒转化入含有Polh+BmBacmid的E.coli DH10β中，筛选同时含有Polh+BmBacmid和辅助质粒的DH10β菌株。本发明可产生经口添食即可感染的重组病毒，重组病毒无需经皮接种感染，提高家蚕杆状病毒表达系统的生产效率。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
