本发明涉及一种D29分枝杆菌噬菌体(Mycobacterium phage D29)来源的PK34多肽及其应用,属于生物医学领域。本发明的PK34多肽是D29分枝杆菌噬菌体基因组p63基因编码的一种直链多肽,其前体含有78个氨基酸残基,成熟肽含有34个氨基酸残基,分子量3957.55道尔顿,等电点10.25,全序列一级结构为:Pro Arg Val Ile Glu Thr Lys Val His Gly Arg Glu Val Thr Gly Leu Ala Arg Asn Val Ser Glu Glu Asn Val Asp Arg Leu Ala Lys Arg Trp Ile Lys。本发明的人工合成的PK34多肽能显著抑制结核分枝杆菌的生长,能够作为制备抗结核杆菌药物制剂的应用。本发明还具有结构简单、人工合成方便、作用迅速的有益特点。